Fractionnement cellulaire

En biologie cellulaire , le fractionnement cellulaire est le processus utilisé pour séparer les composants cellulaires tout en préservant les fonctions individuelles de chaque composant. Il s'agit d'une méthode qui était à l'origine utilisée pour démontrer la localisation cellulaire de divers processus biochimiques . D'autres utilisations du fractionnement subcellulaire consistent à fournir une source enrichie d'une protéine pour une purification ultérieure et à faciliter le diagnostic de divers états pathologiques.

Les tissus sont généralement homogénéisés dans une solution tampon isotonique pour arrêter les dommages osmotiques. Les mécanismes d'homogénéisation comprennent le broyage, le hachage, le hachage, les changements de pression, le choc osmotique , la congélation-décongélation et les ultrasons . Les échantillons sont ensuite conservés au froid pour éviter les dommages enzymatiques. Il s'agit de la formation d'une masse homogène de cellules (homogénat cellulaire ou suspension cellulaire ). Il s'agit de broyer les cellules dans un milieu approprié en présence de certaines enzymes ayant un pH, une composition ionique et une température corrects. Par exemple, la pectinase qui digère la lamelle moyenne des cellules végétales.

Cette étape peut ne pas être nécessaire en fonction de la source des cellules . Les tissus animaux sont toutefois susceptibles de produire du tissu conjonctif qui doit être éliminé. Généralement, la filtration est réalisée soit en versant à travers une gaze , soit avec un filtre à aspiration et le filtre en céramique de qualité appropriée.

La purification est réalisée par centrifugation différentielle : l’augmentation séquentielle de la force gravitationnelle entraîne la séparation séquentielle des organites en fonction de leur densité .